- 第一代DNA测序技术在1975年，由Sanger等人开创，并在1977年完成第一个基因组序列(噬菌体X174)，全长5375个碱基。研究人员经过30年的实践并对技术及测序策略的不断改进(如使用了不同策略的作图法、鸟枪法)，2001年完成的首个人类基因组图谱就是以改进了的Sanger法为其测序基础。
一代测序的原理是首先在模板中分别加入A、T、G、C和四种ddNTP双脱氧核苷酸（加入ddNTP序列合成会终止）。第一个加入ddATP，这样每一个位置上的A位置会大量的被ddATP替代，然后终止，然后再分别加入其他的ddNTP，让他随机终止。这样对得到的这些序列进行跑胶。就得到了如下的胶图。根据ACGT的加入顺序和位置，获取信息。这个方法准确率高，费用高，是先合成，再测序的。
一代测序的根本：正常的PCR反应，需要添加dNTP作为合成材料，相邻的两个脱氧核苷酸之间通过形成磷酸二酯键，使得新合成的DNA按照模板不断延伸。第一代测序基于PCR反应，在反应体系中掺入了一定量的ddNTP，ddNTP不含3’-OH，无法和下一个核苷酸之间形成磷酸二酯键，DNA链终止延伸。
一代测序的相对于二代测序来说，读长较长。极为准确。但是测序成本高，通量低。
优势：
- 准确性高：过程细致，质控环节多，不容易污染，测序结果直观可视，不用建库因而假阳性结果极低。可以分辨出碱基置换、颠换、缺失和插入4种变异形式。
- 针对个性化基因检测有价格优势：第一代测序价格低廉，设备运行时间短，适用于低通量的快速研究项目。
劣势： - 测序通量低：第一代测序技术一个反应只能得到一条序列；
- 对于大量测序成本略高：第一代测序技术虽然单个反应价格低廉，但是获得大量序列的成本很高。
应用 - PCR产物测序：对目的基因的PCR产物进行测序，得到目的基因序列；
- 重测序：突变、SNPs、插入或缺失克隆产物的验证；
- 分型分析：微生物和真菌分类学鉴定、HLA分型、病毒分型等；
- 临床应用：肿瘤突变基因的检测和肿瘤个体化治疗，致病基因位点明确并且数量有限的单基因遗传病检测；
- 对新一代测序技术的结果进行验证。
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